外泌体粘附摄取实验
一、技术简介
DiO是一种膜蛋白荧光染料，与分离的外泌体孵育后，可以标记上外泌体，使外泌体带上荧光，通过加入荧光标记好的外泌体与靶细胞进行孵育，荧光显微镜检测靶细胞中荧光富集情况，用以判断靶细胞是否可以内吞外泌体。
二、实验流程
1、外泌体标记
a. 准备：以200 μg蛋白质/150 μL PBS的外泌体为基准，加入5 μL EvLINK探针；
b. 标记：室温、避光、温和混匀共孵育30 min；
c. 收集：收集纯化后样品以备后续实验使用。
2、细胞吞噬标记后外泌体
a. 细胞准备：将细胞以2~5×104个/孔的密度接种24孔板，培养24h；
b. 细胞吞噬外泌体：测定（1）中标记后的外泌体的蛋白浓度，以每孔50 μg/mL 的蛋白终浓度加入培养孔，继续培养24 h（细胞吞噬过程）。
3、细胞膜标记
a. 准备：完成24h外泌体吞噬的细胞继续以下操作；
b. 清洗：将细胞培养基弃掉，使用DPBS洗2-3遍（除去培养基中血清成分）；
c. 细胞膜标记：将10 μL的DiO使用DPBS稀释至500 μL加入24孔板的每孔中，在室温且避光条件下孵育30 min（细胞贴壁状态染色，悬浮细胞详见说明书）；
d. 清洗：孵育结束后使用DPBS清洗2-3遍，将游离染料去除；
e. 固定后核染：最后使用4% PFA固定液固定30 min，后续进行细胞核染色、共聚焦拍照等处理。
三、结果展示
四、服务流程
五、服务说明及结果
1.客户提供:培养好的细胞和作用药物。
2.公司提供:原始数据及分析结果、完整的实验报告。
3.实验周期:10个工作日，具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。
