细胞增殖实验(CCK8法)

一、技术简介

        细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。CCK-8细胞增殖检测试剂盒能快速灵敏地检测细胞增殖和细胞毒性。工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，WST-8可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan），其颜色的深浅与存活细胞数目的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值，可以间接反映活细胞的数量。

二、实验流程

1、取对数生长期的细胞制备细胞悬液，细胞计数；

2、根据合适的铺板细胞数接种到 96 孔板中，每孔约 200 ul（2×10³-2×10⁴/孔）细胞悬液，同样的样本可做 3-5 个重复，将 96 孔板在 37℃、5%CO2 培养箱中培养 24,48,72 h；

3、设置空白对照组：不加细胞只加培养液的空白对照，其他试验步骤保持一致。细胞接种后贴壁大约需要培养4-8小时；

4、加入20ul CCK8：由于每孔加入CCK8 量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。或者直接配置含 10% CCK8 的培养基，以换液的形式加入；

5、培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）；

6、测定 450 nm吸光度

三、结果展示

四、服务流程

五、服务说明及结果

1.客户提供:培养好的细胞和作用药物。

2.公司提供:原始数据及分析结果、完整的实验报告。

3.实验周期:10个工作日，具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。