细胞周期（流式)

一、技术简介

细胞周期（cell cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为间期与分裂期两个阶段。

          细胞周期检测的原理：PI法是经典的周期检测方法。PI为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。

二、实验流程

1、培养细胞，铺板（以6孔板为例），根据实验需要进行相应处理。

2、取出六孔板，PBS沿壁加入，清洗1次

3、加入0.5 mL 0.25%无EDTA的胰酶消化细胞；加入1 mL细胞培养基，终止消化

4、1000 rpm离心10min，弃上清；PBS 1mL清洗1次，1000 rpm离心10min，弃上清

5、逐滴缓慢加入5 mL预冷的70-80%的乙醇，涡旋混匀，4℃避光过夜

6、1000 rpm离心10min，弃上清，PBS清洗3次去除所有乙醇

7、流式细胞仪上样，每管样本需10E6，加入200 μLPBS重悬，加入5 μL PI染料，20 μL 1mg/mL的RNase轻轻混匀

8、室温避光孵育15min

9、分析前避光保存样品，1h内上机检测 作者：西分测小师妹 https://www.bilibili.com/read/cv14771100 出处：bilibili

三、结果展示

四、服务流程

五、服务说明及结果

1.客户提供:培养好的细胞以及所需药品。

2.公司提供:原始数据及分析结果、完整的实验报告。

3.实验周期:10个工作日，具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。